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Millipore 提(ti)供了一種(zhong)用(yong)于核酸(suan)應用(yong)轉(zhuan)印膜選(xuan)擇(ze)。 使用(yong)帶正電的(de) Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印膜可以(yi)在 Southern blotting，Northern blotting 和(he) colony/plaque lifts 實(shi)驗中(zhong)獲得出色的(de)結果。 Immobilon-NC 轉(zhuan)印膜，是主要的(de) Southern 和(he) colony/plaque 實(shi)驗方案中(zhong)zui初使用(yong)的(de)膜，也可作為一種(zhong)靈敏度較低但更經濟的(de)選(xuan)擇(ze)。
Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉印膜，非常適合于可靠與可重現的轉移、固定、雜交及隨后的重復雜交實驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號。 此膜經強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復雜交試驗至關重要。
可提供詳細的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉印膜時可用于優化轉印結果。
Southern Blotting
直接比較三種(zhong)帶正電尼龍膜在各自優(you)化實驗(yan)方案下(xia)的表現：每(mei)種(zhong)膜在其推薦的紫外(wai)波長照(zhao)射下(xia)交(jiao)(jiao)聯。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印(yin)膜的雜交(jiao)(jiao)信(xin)號是(shi)其它兩(liang)種(zhong)膜的 2 倍。
12 次重(zhong)復雜交之后的信號強度
尼龍膜在 254 nm 交聯，并進行了多次重復雜交，依次為：用 32P 標記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 32P 標記探針做第 7 次雜交，然后進行 5 次模擬雜交以及用 32P 標記探針做第 13 次雜交。 在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實雜交*一樣，區別在于未加 32P 標(biao)記(ji)探(tan)針(zhen)。 在(zai)整個重復雜交(jiao)過程(cheng)中(zhong)，Immobilon-Ny+ 的(de)信號強度(du)是(shi)競爭產(chan)品 A 和 B 的(de)兩倍。
檢測靈敏度
將凝膠上(shang) DNA 的(de)量(liang)減(jian)少到(dao) 0.01 ng。 0.1 lane（條(tiao)帶）中(zhong)(zhong)的(de) 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與(yu) DNA 的(de) 0.48 和 0.42 pg 相對(dui)應。 大約相當于 10 µg 人類基(ji)因組 DNA 中(zhong)(zhong)一個單拷貝(bei)基(ji)因序列。 可通過對(dui)探針濃度(du)加倍來(lai)提高(gao)靈敏度(du)。 在 0.01 ng 條(tiao)帶中(zhong)(zhong)，與(yu)競爭產品 A 相比(bi)，Immobilon-Ny+ 轉印(yin)膜靈敏度(du)稍(shao)高(gao)，而(er)背(bei)景信(xin)號更低。
用化學發光檢測(ce)進行 Northern Blotting
鼠肝(gan)的全(quan)部 RNA （1 µg） 在甲(jia)醛(quan)瓊(qiong)脂糖凝膠中電(dian)(dian)泳分離，然后通過(guo)毛細作用轉(zhuan)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印膜和競爭產品帶(dai)正(zheng)電(dian)(dian)尼龍膜 “A”。 與(yu)烘焙(bei)相(xiang)比，通過(guo)紫外交聯固定RNA 能(neng)增強信號(hao)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuan)印膜比競爭產品 A 表現出更高的靈敏(min)度。
Colony Lifts
將載有 pUC19 或 pLH2（2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細菌懸浮液置于瓊脂培養皿中，在 37°C 下培養過夜。 將培養皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1– 2 mm）轉印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉印至競爭產品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm， 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交聯。 然后用 a 32P 標記(ji)的 DNA 探針對膜進行雜交，并使用磷屏成像系統顯色。
Immobilon-NC 轉(zhuan)印(yin)膜是(shi)一種(zhong)經濟型選擇，用于(yu)核酸和蛋白質(zhi)印(yin)跡實(shi)(shi)驗方(fang)案。 這種(zhong)轉(zhuan)印(yin)膜是(shi) Southern、colony/plaque 以(yi)及蛋白質(zhi)實(shi)(shi)驗方(fang)案中zui初使用的(de)(de)膜。 NC HATF 所(suo)含的(de)(de)混合纖維素酯(zhi)基(ji)質(zhi)，不含在(zai)細(xi)胞生長過程中會干擾細(xi)胞壁完整性(xing)(xing)的(de)(de)表面活性(xing)(xing)劑。 這些膜用于(yu) colony lifts。 NC HAHY 所(suo)含的(de)(de)混合纖維素酯(zhi)基(ji)質(zhi)，所(suo)帶(dai)的(de)(de)表面活性(xing)(xing)劑能夠增強可濕性(xing)(xing)以(yi)及轉(zhuan)印(yin)過程中的(de)(de)處理能力(li)。 兩種(zhong)膜對核酸和蛋白質(zhi)都具有高吸附容量。 適(shi)用于(yu)常規轉(zhuan)印(yin)。
訂購信息：
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC08250 | 82 | 50 | ||
| INYC08550 | 85 | 50 | ||
| INYC13250 | 132 | 50 | ||
| INYC13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HATF08250 | 82 | 50 | ||
| HATF08550 | 85 | 50 | ||
| HATF13250 | 132 | 50 | ||
| HATF13750 | 137 | 50 |
| 目錄編號 | 濾膜直徑，mm | 數量/包裝 | ||
|---|---|---|---|---|
| HAHY08250 | 82 | 50 | ||
| HAHY08550 | 85 | 50 | ||
| HAHY13750 | 137 | 50 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸，cm x cm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| INYC61150 | 6 x 11 | 50 | ||
| INYC09120 | 9 x 12 | 10 | ||
| INYC10100 | 10 x 10 | 10 | ||
| INYC15150 | 15 x 15 | 10 | ||
| INYC20200 | 20 x 20 | 10 | ||
| INYC22220 | 22.2 x 22.2 | 10 | ||
| INYC2222C | 22.2 x 22.2 | 100 | ||
| INYC26260 | 26 x 26 | 10 | ||
| INYC00010 | 30 x 330 | 1 |
| 比較 | 目錄編號 | 濾膜尺寸，cm x cm | 數量/包裝 | |
|---|---|---|---|---|
| HAHY304F0 | 30 x 30 | 10 | ||
| HATF00010 | 33 x 300 | 1 |
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